下喘氣道沾染是一種常見的沾染性疾病，嚴重風險人類康健。據世界衛生結構的統計，2008年環球下喘氣道沾染的病死率為61，居人類十大死因的第3位。下喘氣道沾染的常見病原體包含有細菌、病毒、支原體、衣原體及寄生蟲等。研討結局顯示，對病原體正確可信的診斷是有效管理下喘氣道沾染、提高治愈率和減低細免 水 百 家 樂菌耐藥性的主要擔保。但目前臨床通例采用的細菌培育、病毒分解等病原學檢測專業全面存在著耗時長、敏銳度差等缺陷，大大減低了檢測效率，難以對臨床抗沾染調治施展有效的開導作用。
比年來，跟著分子生物學的飛速成長，病原學診斷與分子生物學專業深厚交融，形成了病原學分子診斷專業。這一新興專業的突起，完全打破了傳統的重要靠培育檢測的局限性，并憑借其快速、正確、敏銳及特異等優勢在病原學診斷方面凸顯作用，為下喘氣道沾染的診斷、調治及新型病原體的檢出和細菌耐藥機制的研討等方面提供可信的專業支持。現將下喘氣道沾染的病原學分子診斷專業的進展綜述如下。
一、核酸檢測
分子生物專業最早用于病原學診斷是從核酸檢測開端。核酸檢測專業成長至今，大要經驗了核酸雜交、分解、擴增及基因芯片、PCR、DNA圖譜解析及DNA測序等專業。
1．核酸雜交：最早顯露的核酸雜交專業是應用生物素、放射性同位素、酶等標誌的探針與樣品的核酸片斷進行雜交，通過檢測特異的雜交信號確認病原體。該專業的特色是特異度和敏銳度均高，幾乎靠攏100，獨特是后續成長的熒光原位百家樂如何贏雜交 FISH專業，在病原學分子診斷的早期起到了至關主要的作用。核酸雜交專業的要害在于探針的設計，目前，軍團菌探針、肺炎支原體探針、EB病毒探針、喘氣道合胞病毒探針及肺孢子菌探針等已陸續問世，使下喘氣道沾染的代表和非代表病原體的診斷成為可能。Edelstein等制備的cDNA探針具有軍團菌屬的特異性，經美國基因探針公司改進后，成為商用探針試劑盒，已被臨床試驗室采用。Hyman等制備的DNA探針可檢出含量僅為01 ng的肺炎支原體DNA。Hernandez等采用核酸雜交專業勝利檢測到喘氣道合胞病毒。核酸雜交專業是其他核酸檢測的根基，為病原學分子診斷的開展邁出了主要的一步。
2．集合酶鏈反映PCR：自20世紀80年月問世以來，PCR專業被廣泛利用于各個領域，具有劃時代的意義。從最早的尺度PCR，漸漸成長到多重PCR multiplex PCR、巢式PCR nested PCR、迴轉錄PCR RT-PCR以及即時定量PCR real-time quantitative PCR等，目前PCR專業已有十幾種，其擴增本事和精準性逐步提高。尺度PCR重要是針對某單一基因片斷進行擴增，多重PCR可同時擴增多個基因片斷，而巢式PCR以及目前廣泛利用的即時定量PCR在檢測正確性方面則更具優勢。
眾所周知，對于肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養菌以及嗜肺軍團菌、肺炎支原體等非代表病原體來說，臨床分解、培育難度很大，大大減低了臨床檢出率，而PCR專業可以補救這一不足。Morozumi等采用即時定量PCR專業，從429例成人和兒童肺炎臨床標本中檢測到肺炎鏈球菌的lytA基因、軍團菌的mip基因以及肺炎支原體的16S rRNA，整個檢測過程僅耗時2h，且與傳統的細菌培育想法比擬，敏銳度和特異度均大大提高。除了上述病原體外，Kaazu等還利用即時定量PCR專業在喘氣道排泄中檢測到了曲霉，衝破了曲霉培育的種種限制。不光針對細菌，PCR專業在病毒診斷方面也絕不減色。Beckham等應用迴轉錄PCR想法對194例合并喘氣道病毒沾染的COPD患者的咽拭子樣本進行了病毒檢測并與通例分解和血清學檢測想法進行了對照，結局發明PCR想法的病毒檢出率為41 8，而通例想法的檢出率僅為234，這一結局對于COPD急性發生患者的病原學快速診斷頗具意義，還可以開導用藥，收縮患者住院時間。
內地對于病原體PCR診斷的研討也十分迅猛，方健等應用PCR專業可同時檢測15種喘氣道病原體。2003年SARS暴發時期，研討者正是采用了即時定量PCR專業和DNA測序專業才幹在短短3個月內將SARS的元兇鎖定為新型冠狀病毒。2009年，我國發明的新型布尼亞病毒也是利用了此項專業。
另有，PCR專業在檢測細菌耐藥方面也施展了主要作用。研討結局表示，與細菌耐藥關連的因子如新德里金屬-β-內酰胺酶1（NDM-1）、超廣譜β-內酰胺酶ESBL、青霉素交融蛋白2a PBP2a、外膜孔蛋白OprD等都有對應的基因片斷，因而可以通過設計差異的引物來檢測這些基因。Diene等采用即時定量PCR專業檢測了128株菌株中NDM-1基因，顯示了該專業對碳青霉烯類抗生素耐藥機制研討的快速、敏銳等優勢。管希周等應用多重PCR專業發明了同時產AmpC β-內酰胺酶AmpC和ESBL的肺炎克雷伯桿菌及其耐藥表型。利用PCR專業進行耐藥研討，避免了細菌分解、培育及藥敏實驗等繁瑣的操縱程序。比年來，跟著多種PCR想法聯盟利用以及大批商品化試劑盒的顯露，該專業正日益走向成熟。
3．DNA圖譜解析：除了核酸雜交、PCR等針對病原體某一特定核酸片斷進行檢測的專業外，還有針對病原體全基因組DNA進行檢測的專業。目前常用的專業包含有質粒DNA圖譜分型、染色體DNA限制性內切酶解析以及DNA脈沖場凝膠電泳分型3種專業。這些專業通過采用凝膠電泳、圖譜解析等想法檢測病原體全基因組DNA，從而為病原體檢測和分型提供了新的策略。目前，質粒DNA圖譜以及DNA脈沖場凝膠電泳分型專業已利用于葡萄球菌的分型和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 MRSA耐藥機制的研討。質粒圖譜分型可實用于一切有質粒的病原體；DNA脈沖場凝膠電泳常作為分子生物學分型想法的金尺度，但以上這些專業也存在著DNA圖譜解析較復雜、區分力較低及再現性較差等瑕疵。
4．DNA測序：對于病原體核酸不光要了解其整體組織、片斷構造，還要了解DNA堿基種類、數量以及排序等，這就需求利用DNA測序專業。1977年Sanger和Maxam差別應用雙脫氧鏈終止法和化學降解法測定了DNA序列，此后DNA測序專業開端利用于生物、醫學、法醫及藥學等領域。早在1985年，英國Lambden即應用該專業測定了喘氣道合胞病毒磷酸化蛋白編碼的核苷酸序列，比年來，這一專業已經用于真菌、細菌、結核桿菌及弓形蟲等病原體的檢測，尤其在結核桿菌檢測方面與核酸雜交專業比擬費用顯著減低。但由于測序專業對序列要求較高，因而只能檢測到細菌潛在變動序列的很小一部門，因此目前該專業重要利用于病毒檢測，如2007年我國溫嶺第一人民醫療機構發明了導致小兒下喘氣道沾染的新型病毒-Wu多瘤病毒亞洲種，并辦妥了測序任務。但由于DNA測序專業前提嚴峻、儀器復雜及費用昂貴等來由，目前通常臨床試驗室尚無法進行，重要用于科學研討。
二、蛋白質檢測
對于生物體而言，核酸和蛋白質是決擇其生物學特徵的主要資源，核酸是生物的遺傳資源，而蛋白質則是性命事件的表現者。因此，對病原體的檢測，除了針對核酸以外，還要研討其蛋白性能。跟著人類基因組方案的辦妥，基因組學的研討焦點也遷移到了蛋白性能的研討，而后基因時代應運而生的蛋白質組學，也為喘氣道病原體的研討提供了一個新的平臺。針對病原體蛋白質組學的檢測專業重要是二維電泳和質譜或色譜解析，即將病原體的蛋白通過二維電泳遷移到膠上，再經圖像解析，選取特定的蛋白質黑點，經酶解和后續的質譜或色譜解析以及數據處置，確認病原體的屬性，目前該專業重要用于細菌鑒定和耐藥機制方面的研討。國外學者曾報道用蛋白質組學質譜專業檢測了MRSA和甲氧西林敏銳的金百 家 樂 版 路黃色葡萄球菌 MSSA的蛋白質組學，并解析對照了兩者的不同，從而證明了蛋白質組學在病原診斷方面的作用。另有，Schaar等應用二維電泳和質譜解析想法發明，卡他莫拉菌的外膜囊泡具有很高的生物學活性，是運輸細菌致病因子的要害組織；Soualhine等發明，肺炎鏈球菌突變株的磷酸鹽轉運蛋白與細菌耐藥有關。
三、生物芯片專業
比年來，生物芯片專業得到了迅猛成長，為病原體的檢測提供了新的專業平臺。目前用于病原體檢測的生物芯片重要包含有基因芯片、蛋白芯片以及微流控芯片試驗室等，這些專業憑借其微型化、高通量及主動化等優勢，在微生物病原體檢測、種類鑒定、性能解析診斷、基因分型、突變篩查以及基因組監測等方面正在施展著越來越主要的作用。
基因芯片是最早用于病原體的分子生物學芯片。將典型不同種類病原體的不同凡響基因信息印制在一張基因芯片上，再經迴轉錄過程與樣品交融，即可檢測出樣本中有無特異病原體基因及其表白程度，由此判斷沾染的病原體、沾染歷程以及宿主反映等。目前，由于很多病原體的基因組測序任務已經辦妥，基因芯片專業正在漸漸利百 家 樂 發 牌用于臨床。除了基因芯片外，其他生物學芯片專業也日臻成熟，如Causse等應用DNA芯片和多重迴轉錄PCR想法檢測了喘氣道合胞病毒；2003年我國應用自主研制的全基因組芯片勝利檢測出了SARS病毒。同樣，蛋白芯片在病原體分子診斷方面也有著浩蕩的成長空間，以此為平臺可以檢測出病原體間蛋白表白的不同，尤其對于喘氣道病毒。如楊侃等應用蛋白芯片專業檢測了1022例兒童急性喘氣道沾染患者的病原體，其病毒陽性檢出率與ELISA法無顯著不同，進而也驗證了芯片專業在臨床病原體檢測方面的高效性和方便性。
另有一種值得一提的是微流控芯片專業，也稱芯片試驗室，該專業具有高通量、高效率、低耗損及集成化等特色，在病原體核酸及蛋白檢測方面的優勢正日益凸顯。Song等應用該專業不光實現了細菌分選，還實現了計數和鑒定；Sun等采用微芯片平臺對禽流感病毒的RNA進行了快速檢測。微流控芯片專業固然剛起步，但其在分子診斷方面將具有浩蕩的利用遠景。
四、展望
綜上所述，與傳統的細菌培育等檢測策略比擬，分子診斷專業具有特異、敏銳、快速及方便等優勢，必將鄙人喘氣道病原學診斷方面施展越來越主要的作用。盡管目前這些專業尚存在假陽性、假陰性等缺陷，且操縱復雜，本錢昂貴，甚至有些專業仍處于起步和根基研討階段，臨床尚有待推銷。但跟著經濟程度的提高和科技的不停成長，分子生物學專業在臨床中的幻化利用將漸漸成為臨床病原學診斷的重要策略。在不久的他日，借助于分子診斷專業，通過一滴血、一滴尿以及其他體液或結構，就可在最短時間內檢測出病原體，實現快速、方便、高效的病原學分子診斷，為臨床調治提供開導，同時也將大大減低醫療費用，減輕社會的經濟累贅。
